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項(xiàng)目背景：

安鐸生物可飼養(yǎng)大小鼠超過(guò)5萬(wàn)籠，可提供平板架飼養(yǎng)、IVC獨(dú)立飼養(yǎng)、EVC飼養(yǎng)等多種飼養(yǎng)條件，滿(mǎn)足您對(duì)于不同實(shí)驗(yàn)的多樣化需求；同時(shí)提供繁育服務(wù)、基因型鑒定，全方位保證小鼠的品系穩(wěn)定及健康，在此基礎(chǔ)上，公司長(zhǎng)期提供標(biāo)準(zhǔn)化的多種疾病現(xiàn)貨模型，歡迎您的咨詢(xún)與選購(gòu)

案例展示：

轉(zhuǎn)基因繁育策略

轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性小鼠與野生型小鼠交配 TG × WT

每一個(gè) Founder 鼠分別與野生型（WT）小鼠（比如，常用的C57BL/6J）交配，獲得的 F1子代；經(jīng)過(guò)鼠尾基因型鑒定后，F(xiàn)1代中的陽(yáng)性小鼠保留并再與野生型小鼠交配，獲得 F2子代；F2代陽(yáng)性小鼠保留再與野生型小鼠交配，獲得 F3子代；以此類(lèi)推。一個(gè) Founder 鼠產(chǎn)生的子代，稱(chēng)為一個(gè)系。一般以 Founder 鼠的編號(hào)命名，比如：3號(hào) Founder 獲得的后代陽(yáng)性小鼠，稱(chēng)為 3系

基因敲除/敲入繁育策略

雜合子與雜合子交配，獲得純合子+/- × +/- → -/-

對(duì)于采用 ES細(xì)胞打靶途徑獲得的基因敲除（KO）小鼠，在 Flp 重組酶去除 Neo 抗性基因以后，可以通過(guò) KO 雜合子（+/-）之間相互交配的方式獲得1/4KO 純合子小鼠（-/-）、1/2 KO 雜合子小鼠（+/-）以及 1/4同窩野生型對(duì)照小鼠（WT）

條件性基因敲除繁育策略

獲得 flox 純合同時(shí) Cre 陽(yáng)性的小鼠（f/f；Cre-）× （f/+；Cre+） → f/f；Cre+

Flox 小鼠在去除 Neo 基因以后（CRISPR/Cas9 途徑獲得的 CKO 小鼠省略此步驟），獲得僅含有兩個(gè) loxP 位點(diǎn)的 flox 雜合子小鼠（flox/+，可縮寫(xiě)成 f/+）。 flox 雜合子（f/+）小鼠與組織特異性或誘導(dǎo)型 Cre 陽(yáng)性（Cre+）小鼠交配，獲得 flox 雜合同時(shí)帶有 Cre （f/+；Cre+）的小鼠，再與 flox 雜合子（f/+）交配，這樣最終可以獲得1/8的 flox 純合且?guī)в?Cre 的條件性基因敲除小鼠（f/f；Cre+）。

基因型鑒定Genotyping：

基因工程小鼠基因型PCR 鑒定的基本原則是利用基因工程小鼠基因組與野生型小鼠基因組的序列差異，以小鼠基因組DNA為模板進(jìn)行PCR，并以凝膠電泳對(duì)比不同基因型特異產(chǎn)物的大?。ㄒ话悴町愒?00bp以上），根據(jù)電泳條帶差異來(lái)直接區(qū)分小鼠的不同基因型。

適用于：

Knockout（包括CRISPR介導(dǎo)片段敲除）

Conditional knockout

Knock-in（片段敲入）

Generation and genotyping of Tg/ICAM-1-knockout mice. (a) Scheme for the generation of Tg/ICAM-1-knockout mice: IL-4-Tg mice were crossed with purchased homozygous ICAM-1?/? mice to produce heterozygous Tg/ICAM-1+/? and non-Tg/ICAM-1+/? mice. The subsequent cross between heterozygous Tg/ICAM-1+/? mice and heterozygous non-Tg/ICAM-1+/? mice produced homozygous Tg/ICAM-1?/? mice (our testing group), non-Tg/ICAM-1?/? mice (our negative control), and the other littermate control mouse groups. (b) Genotyping of Tg/ICAM-1 KO mice: genotyping of ICAM-1 mice (homozygous and heterozygous) was performed according to the instructions from the ICAM-1?/? mice vendor. Photo shows the results of ICAM-1 genotyping, ICAM-1?/?, ICMA-1+/?, and ICAM-1+/+ (three mice for each group) resulted from our crossing. C1: PCR product using control DNA for ICAM-1?/?, C2: PCR product using control for ICAM-1+/+ (wild type), C3: PCR product without DNA template (negative control).

參考文獻(xiàn)：

VCAM-1 blockade delays disease onset, reduces disease severity and inflammatory cells in an atopic dermatitis model.Immunol Cell Biol. Mar-Apr 2010;88(3):334-42. doi: 10.1038/icb.2009.107. Epub 2010 Jan 12.