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技術(shù)資源
冠心病 (CHD) 是導(dǎo)致心血管疾病的最重要原因,由動脈粥樣硬化斑塊或血栓形成導(dǎo)致冠狀動脈急性閉塞都可能導(dǎo)致心肌梗塞和心力衰竭。小鼠心肌缺血再灌注模型有助于為研究急性心肌梗死提供可靠的依據(jù)。
永久性左降支冠狀動脈(left main descending coronary artery,LCA)閉塞引起心肌梗死,以及暫時性冠狀動脈閉塞引起I/R損傷是最常用的兩種模型。大多數(shù)研究人員仍使用需要使用開胸的方法,這會導(dǎo)致大量的組織損傷、手術(shù)相關(guān)死亡,并且可能相當耗時。現(xiàn)在有一種新型的不需要開胸的建立心肌梗死模型的方法。
模型建立:
(1) 小鼠用2%異氟烷麻醉后仰臥固定于手術(shù)臺上,小鼠痛覺消失后,接上心電圖機獲得穩(wěn)定的Ⅱ肢體導(dǎo)聯(lián)。
(2) 消毒小鼠胸部毛發(fā),在胸骨左側(cè)第3、4肋間沿胸大肌邊緣做一長1 cm左右切口,鈍性分離皮下組織、胸大肌和前鋸肌,用蚊式鑷穿過第3、4肋間,快速擠出心臟。
(3) 在光源下,于左心耳下1~2 mm處找到冠狀動脈左前降支(LAD),選用6-0絲線,結(jié)扎LAD,進針深度約1 mm,寬度1~2 mm,避免穿透心臟。結(jié)扎線打成活結(jié),近針端剪短,遠針端線頭留3~4 cm于胸腔外。假手術(shù)組僅穿線不結(jié)扎。
(4) 結(jié)扎后可見結(jié)扎處以下心室壁變成暗紅色,將心臟緩慢推入胸腔內(nèi)。擠出胸腔內(nèi)氣體,胸壁切口作一荷包結(jié)打緊,關(guān)上胸腔,將結(jié)扎線頭留于胸外用于冠脈再通。
(5) 結(jié)扎后5 min內(nèi)密切觀察心電圖改變。
(6) 拿下麻醉面罩,小鼠會在2~3 min內(nèi)蘇醒,整個構(gòu)建心肌缺血的時間控制在1 min內(nèi)完成。
(7) 手術(shù)組小鼠分別于缺血15、30和45 min后,緩慢拉出結(jié)扎線,恢復(fù)心肌血流供應(yīng)。
(8) 24 h后,記錄心電圖數(shù)據(jù)并進行伊文思藍-TTC染色。
手術(shù)組小鼠存活率90%,缺血再灌注造模成功率86.7%。
LAD結(jié)扎5 min后小鼠出現(xiàn)T波高聳,ST段抬高,QRS波增寬。隨著再灌注時間延長,ST段逐漸回落。
與經(jīng)典的心肌梗死結(jié)扎模型方法相比,此方法明顯可以在更少的時間內(nèi)完成。這種更快的手術(shù)可以有效減少組織損傷和炎癥反應(yīng),心律失常的發(fā)生率更低,術(shù)后恢復(fù)更快。